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液相色譜儀進樣閥的清洗方法

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液相色譜儀進樣閥的清洗方法

進樣閥在進樣過程中,必須是非常清潔的,否則得不到較好的結(jié)果。

進樣閥切換到進樣位置后(Inject),要在此位置上保持一段時間,使流動相充分沖洗樣品定量管,這樣可以保證有較高的精確度,而且不用另外再沖洗樣品定量管。這種有色譜儀器控制的沖洗顯然要比手動沖洗的更好些。

注意:沖洗需要的流動相體積至少為所進樣品的10倍。例如,如果取20ul樣品至100ul的定量管中,而流動相此時的流速為1ml/min,則需要在進樣位置上至少保持12s,即:20ul×10/1000ul·min-1=0.2min=112s。

當樣品定量管經(jīng)過充分的沖洗后,可以將旋柄轉(zhuǎn)回取樣位置(Load),也可以繼續(xù)保持在進樣位置,到下次取樣前才切換回取樣位置。在切換回取樣位置時,將樣品進樣針或微量樣品進樣針從進樣閥中拔出。

為防止交叉污染,正常情況下不必每次進樣后都清洗進樣閥注射針導入口。進樣閥內(nèi)根據(jù)設(shè)計的直接連接進樣孔,可以使注射針頭的前端直接連接到樣品定量管的末端,沒有其他空間供樣品殘留。這樣在下一次進樣時,就不會有上一次殘留的樣品進入定量管。

但是進樣針頭插入或撥出過程中,會有痕量的樣品沉積在針頭密封區(qū)域。精密的測定顯示這種殘留有1nl-10nl。這表明進20ul樣品,會殘留0.005%~0.05%。每次進樣后沖洗注射針導入口可以將此殘留沖洗干凈。

沖洗注射針導入口的過程為:設(shè)定流動相流速為0.1ml/min~1ml/min,將注射針導入口沖洗頭連接到一只體積較大的注射器上,用大量的流動相只在進樣位置清洗注射針導入口。這樣進入進樣閥中的液體繞過樣品定量管由樣品溢出管口排出。這一過程可以將注射針導入口、引導管、注射針導入管和注射針密封圈清洗。而采用注射器全插入式的沖洗方式,則不能全部清洗上述部件的表面。在取樣位置將注射針插入注射針導入口時,針頭推動注射針密封圈內(nèi)少量樣品液體(上一次沖洗注射針導入管留下的)進入樣品定量管。當該樣品液體與所用的流動相組成不同,且同時采用部分充滿定量管的進樣方式時,在高靈敏度的檢測器上可能出現(xiàn)怪峰。

所以沖洗注射針時最好用流動相沖洗。

如果已發(fā)現(xiàn)有嚴重的交叉污染現(xiàn)象,請檢查是否有下列原因造成:

  1. 使用的注射針頭長度不夠(針頭的長度至少5cm),注射針末端不能到達定子表面。

  2. 注射針沒有充分插入注射針導入口。

  3. 注射針導入口的污染物或針頭密封磨損下來的削片,使注射針末端不能接觸定子表面。

如果不考慮交叉污染,每進樣10次,或20次最好沖洗一下注射針導入口,這樣可以保證注射針導入管內(nèi)充滿流體。在注射針插入或拔出的過程中,清洗注射針頭或稀釋污染這一區(qū)域的樣品的同時也使注射針導入口和樣品溢出口充滿流體,從而防止空氣進入樣品管。


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